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NC轉(zhuǎn)印膜、PVDF轉(zhuǎn)印膜、正電荷尼龍轉(zhuǎn)印膜的優(yōu)缺點對比

1、什么是Western Blot
2、NC轉(zhuǎn)印膜、PVDF轉(zhuǎn)印膜、正電荷尼龍轉(zhuǎn)印膜的優(yōu)缺點對比
3、邁博瑞轉(zhuǎn)印膜推薦

一、什么是Western Blot

就像與SDS提供的電荷結(jié)合一樣，蛋白質(zhì)可以在電場中從凝膠轉(zhuǎn)移到堅固的載體上，即從凝膠中“印跡”到膜。這種方法被稱為蛋白免疫印跡轉(zhuǎn)印。

Western Blot

蛋白免疫印跡法中蛋白從凝膠轉(zhuǎn)印到膜上

轉(zhuǎn)膜方式主要有兩種：濕轉(zhuǎn)和半干轉(zhuǎn)。兩者原理相同，只是用于固定膠/膜疊層及施加電場的儀器有不同。半干轉(zhuǎn)耗時短，但是更適合小分子蛋白的轉(zhuǎn)印，而濕轉(zhuǎn)蛋白分子量范圍較寬，在Western Blot實驗中，常用的是濕轉(zhuǎn)。

二、NC轉(zhuǎn)印膜、PVDF轉(zhuǎn)印膜、正電荷尼龍轉(zhuǎn)印膜的優(yōu)缺點對比

在蛋白質(zhì)和核酸的轉(zhuǎn)移和檢測過程中，我們都常用的轉(zhuǎn)印膜有三種：正電荷尼龍轉(zhuǎn)印膜/硝酸纖維素NC轉(zhuǎn)印膜/聚偏二氟乙烯膜PVDF轉(zhuǎn)印膜。不同的轉(zhuǎn)印膜規(guī)格和參數(shù)不同。選擇正確、均一穩(wěn)定的轉(zhuǎn)印膜對達到最佳的實驗結(jié)果起到關(guān)鍵性作用。

PVDF轉(zhuǎn)印膜	NC轉(zhuǎn)印膜	正電荷尼龍轉(zhuǎn)印膜
機械強度高、質(zhì)地柔韌、易于保存化學穩(wěn)定性好、耐腐蝕、不易降解相對較高的蛋白質(zhì)結(jié)合能力和高信噪比可用于多次剝離和雜交需要甲醇等溶液浸泡預(yù)濕活化可用于Western雜交、dot/slot雜交、蛋白質(zhì)測序、以及MS分析。	極易破碎不易操作溶劑不耐受蛋白結(jié)合能力相對較低不利于多次剝離和雜交不需要預(yù)濕處理結(jié)合能力強、不需要活化背景淺、能進行多次免疫檢測并且功能基團壽命長適用于蛋白質(zhì)印跡法、RNA印跡法、DNA印跡法和斑點雜交技術(shù)	高的靈敏度和低的背景信號長耐久性、可耐受多次重復(fù)雜交試驗適用于Southern/Northern/Dot/Slot Blot實驗

在蛋白免疫印跡法中，可根據(jù)靶蛋白分子大小選擇0.2 µm或0.45 µm孔徑的膜。在大多數(shù)應(yīng)用中，PVDF和硝酸纖維素是等效的。請注意，PVDF的容量高于硝酸纖維素，但需要更仔細的預(yù)處理：根據(jù)凝膠大小將膜切割成適當大小，通常比凝膠稍大一點；在甲醇中浸泡約30秒；在ddH2O中清洗約1分鐘，然后在冰冷的轉(zhuǎn)印緩沖液中孵育5分鐘。凝膠還需要在冰冷的轉(zhuǎn)印緩沖液中平衡3-5分鐘。

三、邁博瑞轉(zhuǎn)印膜推薦

MS®轉(zhuǎn)印膜主要是參與Southern印跡雜交和Northern印跡雜交實驗，用于實現(xiàn)基因診斷，通常都是將雜交結(jié)果轉(zhuǎn)移到印記膜上，作為最終判斷依據(jù)。印跡膜有多種形式：0.2um和0.45um的PVDF轉(zhuǎn)印膜、硝酸纖維素轉(zhuǎn)印膜、（Nylon66）尼龍轉(zhuǎn)印膜，這是一種經(jīng)驗證的western 雜交介質(zhì)，PVDF用于高載量免疫印跡和蛋白測序。

名稱	濕潤性	靈敏度和分辨率	背景	機械強度	溶劑耐受性	水潤性	蛋白結(jié)合能力	適用染色方法	檢測方式
Nylon66印跡膜	親水性	高	較高	軟而結(jié)實	較差	緩沖溶液潤濕	>400μg/cm2	不能用陰離子染料	不能用陰離子染料，受限制
NC轉(zhuǎn)印膜	親水性	高	低	干的NC膜易脆	差	緩沖溶液潤濕，避免氣泡	80-110μg/cm2	膠體金、麗春紅、酰胺黑、印度墨汁	常規(guī)染色，可用放射性和非放射性檢測
PVDF轉(zhuǎn)印膜	疏水性	高	淺	機械強度高	好	100%的甲醇潤濕	125-200μg/cm2	膠體金、麗春紅、酰胺黑、印度墨汁、考馬斯亮蘭	常規(guī)染色，較于NC膜可用考馬斯亮藍染色，ECL檢測和快速免疫檢測